利用RRLC改善西洋参HPLC的分离速度和灵敏度
系统：Agilent 1200快速高分离度液相色谱（RRLC），包括：在线脱气机（G1379B），SL型二元泵（G1312B），SL型自动进样器（G1367C），SL型柱恒温箱（G1316B）和SL型二极管阵列检测器（G1315C）。
检测池：2μl
峰宽：0.01min（0.2s）
狭缝：4nm
进样器后管线内径：0.12mm（Seat Capillary为0.17mm）
色谱柱：ZORBAX SB C18 RRHT色谱柱，4.6×50mm，1.8
流动相：A为0.1%的H3PO4，B为乙腈，梯度分离
柱温：25℃
流速：2ml/min
检测波长：203nm
进样量：5μl
RRLC分离的梯度重现性
使用RRLC系统进行快速分离不仅可以获得速度、分离度与灵敏度的改善，同时可以保持液相色谱分离技术的杰出重现性（见图4）。
图4 西洋参分析中RRLC梯度分离的重现性，色谱条件同图3RRLC和HPLC的转换
RRLC的良好兼容型与灵活性，使用户可以根据需要在同一仪器硬件上灵活使用常规HPLC色谱柱和RRLC色谱柱。而键合相品牌丰富的ZORBAX RRHT色谱柱（如SB、XDB、Extend、Eclipse Plus等），又为相同品牌、不同粒径填料之间方法的相互转换提供了便利条件，使RRLC与HPLC之间方法的相互转换非常方便。基于现有RRLC分离条件，也可以非常容易地获得相应HPLC的分离方法。只需用Method Translator将参数进行直接转换，即可获得根据RRLC方法优化参数相应的HPLC条件参数。本研究使用相同的RRLC系统和HPLC色谱柱，获得了分离选择性与RRLC几乎完全相同的HPLC分离结果（见图5）。
图5 西洋参分析中HPLC与RRLC分离色谱图比较值得注意的是：与RRLC相比，HPLC在相同进样量时获得的色谱峰高较低，故相对灵敏度较低。同时，分离时间也大大加长，溶剂消耗亦相应提高。
讨论与结论
－中国药典的药物分析方法中并未指定色谱柱品牌。而不同品牌、相同键合相的色谱柱又存在不同的选择性差异，故直接应用药典方法时往往需要对方法进行调整或优化，尤其是对于复杂样品的分离而言。使用小颗粒短柱的RRLC分离可以显著加快分离速度，故可以大大缩短方法开发和优化过程所需的时间。如此获得的RRLC分离条件，又可以简单方便地转换成常规HPLC方法，并在RRLC系统上实现HPLC分离。所以，使用RRLC系统进行分离会大大提高工作效率。
－RRLC分离不仅可以大幅度缩短分析时间，而且能够降低溶剂消耗。
－RRHT色谱柱拥有与常规HPLC内径相同的4.6mm色谱柱，使之可以接近或保持与HPLC相同的进样量。与HPLC相比，在保持相同进样量的前提下，使用小颗粒填料的RRLC可以显著改善分离灵敏度。
－RRLC可以在快速分析中仍然保持出色的分离重现性。
－不同色谱柱具有不同的选择性，因而可以造成方法转换中的分离状况变化。选择具有相同键合相品牌的不同颗粒色谱柱，会简化HPLC与RRLC方法之间相互转换中的参数优化过程。ZORBAX系列RRHT色谱柱涵盖了非常丰富的键合相品牌，如SB、XDB、Eclipse Plus、Extend等，方便用户灵活选择与HPLC相同品牌键合相的小颗粒填料。
－温度对色谱柱选择性的调节作用不可小视。RRLC具有制冷功能的柱温箱，不仅温度控制范围宽（室温以下15～100℃），而且控温精确高（±0.05℃），即便在室温以下亦能精密控温。快速、精确的温度调节与控制能力，不仅保证了分离的保留时间重现性，而且为用户利用温度进行选择性调节提供了极大的便利。
色谱条件
色谱柱：ZORBAX SB C18 4.6×150mm，5
流动相：A为0.1%H3PO4，B为乙腈，梯度分离
流速：1ml/min
其它条件同图2。(end)
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