理想的三聚氰胺检测方法

常用于工业的三聚氰胺经常与甲醛混合制成一种因阻燃性能而广为人知的塑料——三聚氰胺－甲醛树脂。除了用于制造工作台面、写字板、层压板、粘胶剂、黏合剂、纸张以及织物以外，近来在一些食品中也发现了三聚氰胺的踪迹。调查发现，一些原材料供应商非法地将这种富含氮元素的化学物质添加至食品源中，制造蛋白质含量增加的假象。

一些奶农将牛奶稀释以增加利润，尤其是在技术发展缓慢、牛奶生产的利润率并未随效率的提高而增加的地方。这种稀释行为使得牛奶质量下降，蛋白质、脂肪以及糖的浓度显著降低。一些奶农稀释牛奶的程度高达30%，随后使用三聚氰胺掩饰这种欺诈行为。质量控制设备检测的是正常水平的氮元素（蛋白质含有的），三聚氰胺中高含量的氮能够在检测中蒙混过关，让造假的牛奶作为优质产品通过检测，从而显著地增加利润。

三聚氰胺与三聚氰酸结合后（通常见于三聚氰胺废渣中的一种杂质）在体内聚集，形成不溶晶体，产生严重的毒性。氰尿酸三聚氰胺吸收进入血液，在肾脏微管的尿液中聚集并发生作用。随后结晶，形成大量球形黄色晶体，堵塞并损伤微管中的肾脏细胞，导致严重的肾功能障碍。接触时间延长则会导致其他健康问题，例如生殖损伤、膀胱或肾结石、以及癌症。食品中蛋白质含量的标准检测方法是凯氏定氮法以及杜马斯燃烧法，两种方法测定的都是氮的含量。这些方法不能将三聚氰胺的氮与氨基酸中天然存在的氮元素区分开来。已经有高灵敏度的方法用于检测三聚氰胺，而不是测定氮元素。液相色谱（LC）可以单独使用，或是与串联质谱结合使用（LC/MS/MS），还可以将气相色谱与串联质谱结合使用（GC/MS/MS）。

这些色谱方法非常精确，但对于设备和操作而言，准备及运行的成本都非常高。因此迫切需要一个简单的高通量筛选方法，以合理的成本精确检测牛奶中三聚氰胺的残留量。

经典的ELISA（酶联免疫吸附测定）测量可以作为一个理想的解决方案。这种方法可以在微孔板中进行，因此样品数量较多时可以同时进行，仪器成本也不高。已经开发了免疫测定试剂盒，可以高效、简便、灵敏地检测乳制品、动物饲料以及宠物食品的原料中的三聚氰胺污染物。

本文是关于如何使用简便的ELISAs ，高灵敏地筛选牛奶样品中的三聚氰胺。这些检测需要具备足够的灵敏度，检出10礸以下的三聚氰胺，这是全世界的监管机构对非婴儿类食品设定的界限。

经典的ELISA（酶联免疫吸附测定）测量可以作为
一个理想的解决方案来测定三聚氰胺含量。

检测原理

本研究中，使用了两种来自不同生产商、但是基本原理相同的三聚氰胺ELISA商品试剂盒。未知样品以及辣根过氧化物酶（HRP）标记的三聚氰胺均置于三聚氰胺抗体包被的微孔板孔中。HRP标记的三聚氰胺与未知样品中的三聚氰胺竞争结合抗体。结合率相当于HRP标记物与游离三聚氰胺的浓度比。因此，与抗体结合的HRP标记物的量与样品中游离三聚氰胺的数量反向相关。

结合阶段之后，使用微孔板清洗机去除未结合的物质，加入HRP显色底物。测定的HRP酶活与HRP标记的三聚氰胺的数量成正比，并且与未知样品中三聚氰胺的浓度有关。规定的孵育时间之后中止反应，测定形成的有色染料的量。如果样品中不存在三聚氰胺，通过形成的有色染料的数量及较高吸收值可以得知酶活水平较高。未标记的游离三聚氰胺的量增加，则活力水平和吸收值降低。因此根据校准曲线（随后讨论）就可以直接测定三聚氰胺的浓度。